酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法是以固相載體吸附技術(shù)和免疫酶技術(shù)相結(jié)合建立的一種檢測(cè)方法大鼠D-乳酸脫氫酶ELISA試劑盒操作簡(jiǎn)便，無需特殊設(shè)備，并具有高度的敏感性和準(zhǔn)確性，所以受到大家的廣泛重視，以致在較短時(shí)間內(nèi)，于國(guó)內(nèi)外均取得了較快的進(jìn)展。
ELISA的特點(diǎn) 靈敏度高，檢測(cè)能力可達(dá)10-6mg/ml水平；應(yīng)用范圍廣，既能檢測(cè)抗原又能檢測(cè)抗體，既能定性又能定量；有效期長(zhǎng)，酶標(biāo)抗體于普通冰箱中可保存一年以上，效價(jià)不下降，制成的標(biāo)本，可長(zhǎng)久保存，供隨時(shí)復(fù)查用。
［附］：免疫酶染色法（組化法） 該法的原理與免疫熒光法相似，不同之處在于用酶標(biāo)記的抗體，稱酶標(biāo)抗體。酶標(biāo)抗體與抗原發(fā)生特異性結(jié)合，當(dāng)加入酶的底物時(shí)，底物在酶的催化下，發(fā)生組織化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生有色物質(zhì)，該物質(zhì)不需特殊儀器，在光學(xué)顯微鏡下即能觀察，目前常用的酶是HRP，底物為DAB，可棕褐色沉淀物，使玻片組織標(biāo)本上的抗原所在部位呈現(xiàn)顏色。 大鼠D-乳酸脫氫酶ELISA試劑盒 ELISA測(cè)定時(shí)一般需經(jīng)過以下步驟：固相包被→加待測(cè)樣品→溫育→洗滌+加酶標(biāo)物→溫育→洗滌→加底物→溫育一加終止液→比色→判定結(jié)果。ELISA操作較繁雜，操作不當(dāng)將引起較大的誤差。在操作中應(yīng)注意以下5個(gè)方面。
1．隨著病情的進(jìn)展或由其他因素影響，某些抗體在機(jī)體內(nèi)的含量發(fā)生大幅波動(dòng)，因此有必要對(duì)標(biāo)本進(jìn)行預(yù)處理，例如對(duì)血清標(biāo)本作適當(dāng)稀釋，或離心分離血脂等。間接法測(cè)定中，標(biāo)本適當(dāng)稀釋還可降低非特異性反應(yīng)。
2．加樣一般使用加液器，在ELISA中一般有4次加樣：加標(biāo)本、加酶結(jié)合物、加底物和加終止液。加標(biāo)本時(shí)必須每份標(biāo)本使用一支移液器吸嘴，以免交叉污染。加酶結(jié)合物、底物和終止液時(shí)則不需更換吸嘴。
3．在成批手工檢測(cè)中，還應(yīng)注意操作時(shí)差的影響。加樣及混勻時(shí)間的差異，使抗原抗體反應(yīng)和酶促反應(yīng)時(shí)間不*，對(duì)競(jìng)爭(zhēng)法及定量檢測(cè)影響很大，不注意可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果或定量不準(zhǔn)。
4．洗滌是ELISA操作過程中決定實(shí)驗(yàn)成敗的一個(gè)關(guān)鍵步驟。目的是除去未結(jié)合的免疫反應(yīng)物，終止抗原抗體反應(yīng)，除去標(biāo)本中與反應(yīng)無關(guān)的成分、游離的酶標(biāo)物以及反應(yīng)過程中吸附于固相載體上的非特異性物質(zhì)。可用洗板機(jī)洗板或手工洗板，前者洗滌質(zhì)量較好，各反應(yīng)孔洗滌效果均一，批內(nèi)、批間差異小，手工洗板應(yīng)注意控制各孔洗滌效果，差異不宜太大。
5．準(zhǔn)確判定結(jié)果須使用ELISA測(cè)讀儀（酶標(biāo)儀），比色法判讀可選擇單波長(zhǎng)或雙波長(zhǎng)，根據(jù)反應(yīng)液顏色的不同選用不同波長(zhǎng)的濾光片，以空白孔校零測(cè)定反應(yīng)孔的吸光度值（A值）。酶標(biāo)儀具有良好的重復(fù)性。
大鼠D-乳酸脫氫酶ELISA試劑盒 實(shí)驗(yàn)原理
用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗D-LDH抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗D-LDH抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的D-LDH呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），計(jì)算樣品濃度。